液相色譜儀根據固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）。現代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣體系、溫度控制體系、色譜柱、檢測器、信號記載體系等部分組成。與經典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點。其首要操作過程、原理，注意事項如下。

一、 水相中的溶質溶解辦法

水相中需溶解的無機鹽和表面活性劑等固體溶質，主張選用加熱法，不主張選用振搖、超聲等辦法。因此種辦法的溶解，溶質可能處于“臨界膠團濃度”，這以后一旦遇到某特殊景象（如遇有機溶劑、溫度劇降等），極易分出少數結晶；而一旦分出，便將損害儀器和色譜柱，出現泵頭處分出“鹽和白粉”的現象。

二、 活動相的制造與運用

1. 恒度洗脫

一定是將水相與有機相混合后、抽濾（運用混合型過濾膜），用一個管路（如A管）泵入儀器，這是運用的原則。切勿因節約有機相、便于摸索色譜條件等原因而運用兩個管路（一個純水相、一個純有機相）泵入儀器，即便制造了脫氣機。因此種景象極易造成水相中鹽和表面活性劑的少數分出。

  剩余活動相完全可持續運用，密封后放置陰涼處；待下次實驗時與新制造的活動相混合后抽濾即可。無需憂慮發霉、無機鹽分出、蒸發、份額不準等問題，這些皆為疑神疑鬼的體現。實踐是檢驗真理的唯一標準！實踐吧~

2. 梯度洗脫

活動相制造*為科學的辦法是：A相為高份額的水相-低份額的有機相、B相為低份額的水相-高份額的有機相（英國藥典幾乎均如此）；其次為：A相為高份額的水相-低份額的有機相、B相為純有機相；*不科學的為：A相為純水相、B相為純有機相，如既有質量標準選用了此種辦法，主張改為第二種或榜首種辦法，否則基線漂移嚴峻，難以進行安穩的雜質檢測。

梯度洗脫完畢后，主張經5分鐘回到初始狀態，再平衡5分鐘后開端下一針測定。這10分鐘的安穩極為要害。切勿短時刻內回到初始狀態，會對儀器和色譜柱損害較大。

三、 色譜柱的裝置

標準SOP應為：

取A管路放入活動相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，調查尾液是否呈瀑布狀流出，持續10秒→擰緊泵頭→活動相呈拋射狀從裝置色譜柱的一端噴出，觀測是否呈拋物線狀，持續5秒→流速逐步降至1.0ml/min →裝置色譜柱，待20秒后，活動相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再裝置另一端→手握兩頭螺絲帽，擰緊。

以上裝置次序遵從的是：

逐級排放氣泡和儀器內存留的洗液，使得裝置后氣泡極難混入。自己曾實驗梯度洗脫連續一周，榜首針與*終一針主成分保留時刻相差在6秒以內。

四、 實驗后色譜柱的清洗

1.*為常用的C8柱、C18柱

1.1 活動相僅為乙腈-水或甲醇-水時，持續沖刷30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持實驗時溫度，即可。

1.2 水相中有無機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質時先選用純水（或含有2%甲醇），沖刷A管路（實驗選用哪個管路，就要從頭到尾沖刷該管路），時刻30分鐘（如活動相中有表面活性劑，適當增加時刻），流速1.0ml/min，柱溫可較實驗溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再沖刷30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關閉。完畢后取下色譜柱放置陰涼處。

1.3 很多同仁這以后選用高份額的甲醇沖刷，實屬畫蛇添足，導致殘余的有機相中水相遇到高份額的甲醇后分出少數鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中分出，也導致了色譜柱壽命大為縮短。自己曾運用過一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年（倒著用測非有關物質）。

2. 其他類型色譜柱

查詢獲取怎么科學合理地運用與清洗保存該類型色譜柱的辦法，切勿盲動，否則導致色譜柱功能急劇下降。

五、 實驗次序

作業流程應如下進行：

(1) 0~2小時 制造活動相、對照品和供試品溶液等，切勿催促昨日實驗搭檔。

(2) 2~3小時 選用A管路注入活動相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫才用到B管路），平衡1小時。如活動相中有表面活性劑，主張前一晚小流速過夜，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時后即可開端做實驗。

(3) 3~5小時 測定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開端測定。所謂“不漂移”，一般系指以1.0%自身對照溶液主成分峰高約20%高度來設定的視野規模調查所得，切不可設定得過小，使得雜質峰顯得很突兀、基線顫動得很兇猛，弄得人很憂慮。

(4) 5~8小時 制造完所有樣品，預試了對照溶液和供試品溶液，設定好主動進樣程序，程序*終一針設定為小流速過夜，紫外燈關閉。切勿設定為切換至B管路洗脫，此舉因小失大。

(5) 9~24小時 定心回家，讓儀器主動進樣，除非不安穩的樣品（制造一份測定一針）。充分利用下班后的16小時，做到從容不迫、鎮定自若。如單位還無主動進樣裝置，主張向領導請求購買，因一臺主動比美三臺手動。

(6) 第二天0~0.5小時 檢查并計算昨晚實驗結果，如發現不良記載，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測定從頭制造的該份樣品即可（一起回校對照一針）。無需悉數從頭測定，不要過度謹小慎微。

(7) 第二天0.5~2.0小時 如上沖刷色譜柱，交給這以后實驗搭檔。

六、 液相軟件的運用

現今幾大干流品牌的硬件功能已相差無幾，首要仍是軟件的規劃是否能使操作者得心應手、為所欲為。主張掌握各軟件的批處理、修改樣品處理模板等功能，做到一勞永逸，讓軟件充分為作業所用。“磨刀不誤砍柴工”：自己曾用20分鐘完結500個溶出度樣品數據處理，做出溶出曲線圖。

七、 其他

1. 如需運用正相體系，一定要單獨選用一臺儀器（如二手的、較為破舊的、淘汰的等），切勿選用異丙醇轉換，此舉對儀器損害極大，等于“自殺”。

2. 正相所運用的活動相（如正己烷、環己烷等），無需抽濾，混勻超聲后即可運用，“大道至簡”。

3. 柱溫箱必須制造。如欲經濟，可購買國產柱溫箱。